BOD测定步骤
将水样注满培养瓶，塞好后应不透气，将瓶置于恒温条件下培养5天。培养前后分别测定溶解氧浓度，由两者的差值可算出每升水消耗掉氧的质量，即BOD 5 值。由于多数水样中含有较多的需氧物质，其需氧量往往超过水中可利用的溶解氧（DO）量，因此在培养前需对水样进行稀释，使培养后剩余的溶解氧（DO）符合规定。本实验采用溶解氧仪测定溶解氧。
一般水质检验所测BOD 5 只包括含碳物质的耗氧量和无机还原性物质的耗氧量。有时需要分别测定含碳物质耗氧量和硝化作用的耗氧量。常用的区别含碳和氮的硝化耗氧的方法是向培养瓶中投加硝化抑制剂，加入适量硝化抑制剂后，所测出的耗氧量即为含碳物质的耗氧量。在5天培养时间内，硝化作用的耗氧量取决于是否存在足够数量的能进行此种氧化作用的微生物，原污水或初级处理的出水中这种微生物的数量不足，不能氧化显著量的还原性氮，而许多二级生化处理的出水和受污染较久的水体中，往往含有大量硝化微生物，因此测定这种水样时应抑制其硝化反应。
在测定BOD 5 的同时，需用葡萄糖和谷氨酸标准溶液完成验证试验。
2、测定仪器
一般实验室仪器和：
（1）、850A + 台式溶氧仪（美国ORION公司）。
（2）、TS606/S恒温培养箱：能控制在(20±1)℃。
（3）、溶解氧瓶：250mL。
（4）、单层玻璃采水器。
（5）、量筒：1000mL。
玻璃器皿要认真清洗，不能吸有毒的或生物可降解的化合物，并防止沾污。
3、测定试剂
在测定过程中，除特别说明以外，仅使用符合国家标准的分析纯试剂和蒸馏水，或具有同等纯度的水。水中含铜不得高于0.01mg/L，并不应有氯、氯胺、苛性碱、有机物和酸类。
（1）、0.2mol/L氢氧化钠溶液：将8g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。
（2）、0.2mol/L盐酸溶液：16.6mL浓盐酸溶于水，稀释至1000mL。
（3）、稀释水：在1只1000mL容量瓶中预先加入约500mL水，再分别加入氯化钙溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，然后用水稀释至1000mL，并混合均匀。将此溶液恒温在20℃左右，然后用小型无油空气泵进行曝气，瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布。曝气时间应在2～8 h（也可鼓入适量纯氧），使水中的溶解氧接近饱和（不低于8mg/L）。此稀释水的5日生化需氧量应小于0.2mg/L(8h内使用)。
4、水样处理
（1）、水样的pH值若超出6.5～7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节至7，但用量不要超过水样体积的0.5％。
（2）、水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经训化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或增大稀释倍数，以减少有毒物的浓度。
（3）、含有少量游离氯的水样，一般放置1～2h游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。
（4）、从水温较低的水域中采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水迅速升温至20℃左右，充分振播，以赶出过饱和的溶解氧。
从水温较高的水域或污水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。
（5）、试验水样的稀释
将已知体积水样置于稀释容器中，用稀释水或接种稀释水稀释，轻轻地混合，避免夹杂空气泡。
5、数据处理
按公式计算5日生化需氧量。
6、注意事项
（1）、每次转移水样时，要注意一定不能引入气泡；
（2）、稀释水应临用现配，并且要保证其中有足够的溶解氧和适量的无机营养物；
（3）、对于污染严重的废水，应参照有关标准对水样进行稀释；
（4）、对于毒性较大，微生物含量较少的废水，必须对其进行接种培养，具体方法可参见有关教材。
