一、离心机中离心使用方法
1、淘洗离心法
淘洗离心主要用于整细胞的离心分离。淘洗离心仍然是在离心力的作用下使颗粒沉降分离的过程,是将均匀的淘洗液连续加入到淘洗转子内,在离心力的作用下,颗粒受到方向朝外的离心力和反方向的液流作用,当两种方向的作用力达到平衡时,每一种颗粒按照其沉降速度达到平衡的位置。具有相同性质(如形状、大小、密度等)的颗粒将聚集在淘洗室内,形成一个稳定的区带。质量比较小的颗粒随流体流动的方向流出,这样可以将样品中不需要的悬浮物淘洗出去,保留所需的颗粒。
2、连续流离心机离心方法
连续流离心是在离心力的作用下,连续向连续流转子内加入样品溶液,颗粒在离心力的作用下发生沉淀,上清液受注入样品溶液的压力不断溢出,最终获得所需颗粒。此法适用于溶液稀、处理量大的样品溶液离心这样可以减少开机时间、提高效率。在发酵工业化规模生产中用于细胞和培养液的分离,也可以用于分离不同生长周期的细胞。连续流离心基本原理的一种表述。
3、地壤离心方法
地壤离心的使用一般是在专用离心转子中进行把装入土壤样品的样品杯装入转子,在离心进选择一系列不同转速下形成的离心力场强度,来模拟自然的条件,通过测排水理来研究、推测不同土壤的含水率和保水性等。
二、超速离心机的离心方法
用离心方法分离生物大分子和亚细胞物质的基本原理是根据它们在液体介质中或者沉降速度不同而形成不同的区带,或者它们的密度不同而停留在液体介质中不同的位置而把它们一一分开。前者是沉降速度法,应用该法时液体介质的最大密度要小于样品中最小颗粒的密度,离心时选用高转速和短时间;后者是沉降平衡法,应用该法时液体介质的最大密度要大于样品中最小颗粒的密度,离心时选用较低转速和较长时间。实际操作有
几种形式:
1.差速离心这种方法是选择不同转速的离心,分别分离各个不同组分。例如先用低速沉降大颗粒和上清液,在高速离心上清沉降中等颗粒,最后超速离心上清沉降小颗粒。采用逐级提高离心力分离上情液的方法,把不同大小的颗粒分开。这种方法比较简单,方便。分离的组份沉到管底,因此可以迅速浓缩所要的组份,减少体积。但回收率和纯度是有矛盾的,要提高回收率,势必提高转速或延长离心时间,这样大小相近的颗粒也会沉到管底。因此该法多用于粗提纯或初步浓缩样品。
2.速度区带(或速度梯度)离心本法是将样品放在一个连续的密度梯度液体上,通过离心,大颗粒沉降快,小颗粒沉降慢。经过一段时间,相同的颗粒就在同一深度形成一条带子,因此把各种组份分开来。它适用于分离密度相同、而大小不同的物质,如不同的蛋白质组份密度都差不多,但分子量不一样,用本法很容易将其分开。但对密度不同、大小类似的物质则不易分离。蔗糖梯度是一种常用的介质。用不同浓度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度离心。再分别进行收集处于不同区带里的各个组份。