女贞子系木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实，主要成分为齐墩果酸、熊果酸、乙酰齐墩果酸、女贞子苷等［1］。具有补肝肾阴、乌须明目的功能。《中国药典》2005年版Ⅰ部只对女贞子中的齐墩果酸采用薄层色谱法进行定量控制［2］，但因女贞子中同时还含有熊果酸，为齐墩果酸的同分异构体，化学结构与性质极为相似，以薄层色谱扫描法定量时，齐墩果酸与熊果酸两者无法分离导致含量测定不确。本文对高效液相色谱法与薄层色谱法测定女贞子中齐墩果酸含量进行了比较。现将结果报道如下。
1 仪器与试剂
WATERS 2695/2996型高效液相色谱仪(美国)；CAMAG TLC SCANNER3薄层色谱扫描仪(瑞士CAMAG)；UV-754型分光光度计(上海精密科学仪器公司)；ZF－2型三用紫外仪(上海市安亭电子仪器厂)；齐墩果酸(110790－200304购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；女贞子药材(购自广州致信中药饮片有限公司)；乙腈、甲醇为色谱纯，纯净水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 高效液相色谱法
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取齐墩果酸对照品10.76 mg，加甲醇溶解，制成每毫升含0.538 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备
取女贞子粗粉约0.5 g(批号200510170)，精密称定，加乙醇25 ml，加热回流30 min，放冷，滤过，药渣加乙醇同上重复回流两次，合并滤液，蒸干，残渣加无水乙醇微热使溶解并转移至10 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。
2.1.3 最大吸收波长的选择
吸取齐墩果酸对照品溶液(0.538 mg·ml-1)1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用紫外可见分光光度计，从200～400 nm全波长扫描，齐墩果酸最大吸收波长为204 nm。见图1。
2.1.4 色谱条件与系统适用性实验
色谱柱为kromasil C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流动相为甲醇-水(85∶15)；检测波长为204 nm；流速0.7 ml·min-1；柱温：30℃。自动进样器进样。在此色谱条件下，得色谱图见图2～3。峰形对称，理论板数以齐墩果酸峰计在3 000以上。
2.1.5 线性关系的考察
吸取对照品溶液1，2，5，10，15 μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积积分值。以齐墩果酸微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，求得直线方程为Y=1 006 577.61X－58 700.91，r= 0.999 9。线性范围为0.645 6～4.304 μg。
2.1.6 精密度实验
吸取同一供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪中，测定峰面积积分值，连续6次，齐墩果酸峰面积积分值RSD＝0.75％(n=6)。结果表明仪器精密度良好。
2.1.7 稳定性实验
吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪中，测定峰面积积分值，然后分别在2，4，8，24 h再进样测定。结果表明，供试品在24 h内稳定性良好，齐墩果酸RSD＝0.39％(n=6)。
2.1.8 重复性实验
取同一批样品(批号20051017)，按“2.1.2”项下的方法制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定，测得RSD＝0.75％(n=6)。
2.1.9 回收率实验
精密称取已知含量的供试品(批号20051017)适量(相当于齐墩果酸1.076 mg)，加入齐墩果酸对照品2 ml，依法操作，计算回收率。结果见表1。平均回收率为101.8%，RSD为0.75%。表1 加样回收率测定结果(略)
2.2 薄层扫描色谱法
2.2.1 色谱条件
展开剂为环己烷-丙酮-醋酸乙酯-甲酸 (5∶2∶1∶0.1)；显色剂为10%硫酸乙醇溶液；扫描波长λs= 530 nm，λR=700 nm。
2.2.2 供试品溶液的制备
与“2.1.2”项下同。
2.2.3 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10.76 mg，加甲醇溶解，制成每毫升含1.076 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.4 线性关系的考察 吸取对照品溶液2，4，6，8，10 μl点于同一硅胶G薄层板上扫描，按照上述色谱条件测定峰面积积分值。以齐墩果酸微克数为横坐标，以吸收度积分值为纵坐标，计算回归方程Y＝1620.7X＋1280.7，r＝0.9964，线性范围为：2.02～10.1 μg。
2.3 结果分析
2.3.1 HPLC法取同一批样品(批号：20051017),按照“2.1.2”项下的供试品制备方法制备供试品溶液4份，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，每份重复测定2次，计算。测定结果见表2。
2.3.2 TLCS法分别吸取各供试品溶液6 μl，对照品溶液6，8 μl交叉点于同一薄层板上，按上述方法展开、扫描，测量供试品与对照品吸收度积分值，测定，计算，即得。色谱图见图4，结果见表2。表2 高效液相色谱法与薄层扫描色谱法含量测定结果比较(略)
由表2可以看出，对同一批样品的含量测定结果高效液相色谱法小于薄层扫描色谱法。因齐墩果酸和熊果酸互为同分异构体，TLCS无法分开，导致定量不准确。且由于显色等诸多因素影响，同板与异板间含量测定结果差别较大，所以高效液相色谱法更为准确。
3 讨论
曾对甲酸水(90∶10)、甲醇水(85∶15)、乙腈水(75∶25)、乙腈甲醇水(64∶20∶16)等不同流动相做过对比研究，结果发现以甲醇-水(85∶15)作流动相即可得到满意的色谱峰形，齐墩果酸与熊果酸峰形的分离度也较高。
《中国药典》2005年版Ⅰ部对女贞子中的齐墩果酸采用薄层色谱法进行定量控制，但因女贞子中同时还含有熊果酸，两者是同分异构体，均为齐墩果烷型的五环三萜类化合物，理化性质极为相似，以薄层色谱扫描法定量时，齐墩果酸与熊果酸只显示一个斑点，两者无法分离从而导致定量不准确。而高效液相色谱法测定女贞子中齐墩果酸含量，齐墩果酸峰与熊果酸峰分离度大于1.5，理论板数以齐墩果酸峰计在3 000以上。
将齐墩果酸对照品溶液在紫外可见分光光度计上从200～400 nm全波长扫描，结果齐墩果酸在204 nm处有特征吸收，因此确定204 nm为齐墩果酸的检测波长。
