高速反流色谱法(HSCCC)是一项强有力的分离技术，并逐渐应用于天然产物化学。分析型HSCCC的仪器已经可以得到，并有在天然产物化学方面应用的综述。若干种类型的检测器已经被连接到分析型HSCCC仪器上，其中包括UV、IR和质谱(MS)等检测器。这些系统能提供关于溶质结构的重要信息。然而它们对于HSCCC的应用受限于仪器使用的复杂性(MS)，高噪音水平(UV)或灵敏度(IR)。
光散射作为液相色谱法的一种选择检测原理已被提出。蒸发激光光散射检测法(ELSD)作为一种通用检测方法，是基于以下原理：洗脱液［例如来自一个高效液相色谱(HPLC)柱］被雾化和蒸发，从而在载气流中留下溶质的微小粒子。这些粒子通过一激光束，使光发生散射，散射的光被检测。其响应的大小与通过检测器的溶质质量有关。已经证实，使用HPLC分析碳水化合物和类脂时，ELSD会特别有用。
1 实验
溶媒HPLC级(Burdick & Jackson)。水通过Milli-Q系统(Millipore)净化。参比物从C.Roth Inc.(Karlsruhe,F.R.G.)购买。“微量”高速反流色谱仪与一个30 mL螺旋管和0.85 mm I.D.聚四氟乙烯管从P.C.Inc.(Potomac,MD,U.S.A.)获得；溶媒利用Milton Roy实验室的泵泵取；ELSD系统从Varex(Burtonsville,MD,U.S.A.)获得；色谱图被记录在Varian 9176型图记录仪上(满标1 mV)。
首先用固定相充满HSCCC螺旋管，然后开始旋转，这时固定相被持续泵入。当转速达到1800 r.min-1时，流动相通过入口被引入。当螺旋管达到平衡以后(即流出物由固定相改为流动相时)，将流速调为0.8 mL.min-1。然后，将螺旋管出口与光散射检测器相连接。当基线变得平滑时指示溶媒已被完全蒸发。将化合物1～4(见图1)溶解在固定相里。样品溶液通过Valco公司的六通阀和0.25 mL样品环注入(图1，0 min)。注入的量为300 μg(1)，10 μg(2)，35 μg(3)和20 μg(4)。反压低于1378.95 kPa，运行后固定相保留90%。检测器预热20 min；时间恒量为1 s。将检测器的随意流动设为8，形成一个反压为220.6 kPa的氮载气流。
2 结果和讨论
HSCCC完成的标准化合物1～4的混合物的分离，这种分离由溶媒系统氯仿—甲醇—水(13∶7∶8)下层作为流动相完成。流速为0.8 mL.min-1。螺旋管流出物被直接引入ELSD系统的喷雾室内。喷雾室和排气管的温度被分别设定为110 ℃和80 ℃。设定相对高的温度是为了蒸发流动相中的少量水份，并使非保留固定相(含水的)尽可能微滴化。含水固定相遗留下来不会影响色谱。对于2～4化合物(熔点超过200 ℃)每种化合物每次注射10～35 μg时，可以得到很好的检测响应。而化合物1即使每次注射大于100 μg，也仅可给出相对微弱的检测信号。对此可能的解释为：熔点为117 ℃的7-甲氧基香豆素(1)以液状微滴通过检测器光束，由此导致激光光线不能有效地散射。当同一样品混合物被分离时，其信噪比优于光电二极管检测器。
ELSD是一种灵敏而非专一性的质量检测方法，其检测限大于毫微克数量级。然而，如果物质的熔点等于或小于喷雾室温度，则可能难以检测。正如这里应用的例子。这一点对于一个复杂的样品，象分析植物提取物时则必须考虑。由于ELSD是一个非破坏技术，为了在制备型HSCCC使用这个检测方法，可以在洗脱线上装置一个流量分离管。由于固定相的残留而引起检测噪音，典型的象UV检测器，则被完全消除了。我们的初步结果显示，对分析型HSCCC来说，ELSD是一种理想的、易使用的检测手段。进一步对于无紫外线吸收化合物和高紫外切断的溶媒的评价，目前正在我们实验室进行中。
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